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植物(Plant)脂氧合酶(LOX)ELISA試劑盒

檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被脂氧合酶(LOX)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂氧合酶(LOX)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1.  樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。2.  標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行。3.  植物萃取液或其它相關樣本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測。4.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品酶標儀(450nm)高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱操作注意事項  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍,*終結果乘以5才是樣本實際濃度。  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。  所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標板12孔×8條12孔×4條無標準品0.3mL*6管0.3mL*6管無樣本稀釋液6mL3mL無檢測抗體-HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、25、50、100、200、400 U/mL試劑的準備 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。洗板方法  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。操作步驟  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。結果判斷 繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃

大豆胰蛋白酶抑制因子(ti)ELISA試劑盒

大豆胰蛋白酶抑制因子(TI)ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被大豆胰蛋白酶抑制因子(TI)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大豆胰蛋白酶抑制因子(TI)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1.  樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。2.  標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行。3.  植物萃取液或其它相關樣本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測。4.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品酶標儀(450nm)高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱操作注意事項  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍,*終結果乘以5才是樣本實際濃度。  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。  所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標板12孔×8條12孔×4條無標準品0.3mL*6管0.3mL*6管無樣本稀釋液6mL3mL無檢測抗體-HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、50、100、200、400、800 ng/mL試劑的準備 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。洗板方法  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。操作步驟  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。結果判斷 繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。  

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