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雞胰島素(INS) ELISA 試劑盒

標本的采集及保存 1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 注:標本溶血會影響**檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。 標本的稀釋原則: 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。**計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。 標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。 生物素標記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。 2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。 3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。 5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。 8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。 注: 1. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。 2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。 洗板方法 手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 注意事項 1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。 2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。 5. 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請**乘以稀釋倍數。 6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項: 收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本, 將標本及時分裝后放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。 計算: 以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標, 在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋 倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值 代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋 倍數,即為樣品的實際濃度。 試劑盒性能: 1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。 2.批內與批見應分別小于9%和15% 保存條件及有效期: 1.試劑盒保存:2-8℃。 2.有效期:6個月

雞垂體腺苷酸環化酶激活肽27(PACAP-27) ELISA 試劑盒

標本的采集及保存 1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 注:標本溶血會影響**檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。 標本的稀釋原則: 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。**計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。 標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。 生物素標記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。 2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。 3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。 5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。 8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。 注: 1. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。 2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。 洗板方法 手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 注意事項 1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。 2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。 5. 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請**乘以稀釋倍數。 6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項: 收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本, 將標本及時分裝后放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。 計算: 以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標, 在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋 倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值 代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋 倍數,即為樣品的實際濃度。 試劑盒性能: 1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。 2.批內與批見應分別小于9%和15% 保存條件及有效期: 1.試劑盒保存:2-8℃。 2.有效期:6個月

雞垂體腺苷酸環化酶激活肽38(PACAP-38) ELISA 試劑盒

標本的采集及保存 1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 注:標本溶血會影響**檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。 標本的稀釋原則: 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。**計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。 標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。 生物素標記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。 2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。 3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。 5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。 8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。 注: 1. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。 2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。 洗板方法 手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 注意事項 1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。 2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。 5. 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請**乘以稀釋倍數。 6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項: 收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本, 將標本及時分裝后放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。 計算: 以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標, 在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋 倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值 代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋 倍數,即為樣品的實際濃度。 試劑盒性能: 1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。 2.批內與批見應分別小于9%和15% 保存條件及有效期: 1.試劑盒保存:2-8℃。 2.有效期:6個月

雞早老素1(PS1) ELISA 試劑盒

標本的采集及保存 1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 注:標本溶血會影響**檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。 標本的稀釋原則: 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。**計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。 標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。 生物素標記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。 2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。 3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。 5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。 8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。 注: 1. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。 2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。 洗板方法 手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 注意事項 1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。 2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。 5. 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請**乘以稀釋倍數。 6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項: 收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本, 將標本及時分裝后放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。 計算: 以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標, 在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋 倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值 代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋 倍數,即為樣品的實際濃度。 試劑盒性能: 1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。 2.批內與批見應分別小于9%和15% 保存條件及有效期: 1.試劑盒保存:2-8℃。 2.有效期:6個月

雞胸腺肽α1(Ta1) ELISA 試劑盒

標本的采集及保存 1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 注:標本溶血會影響**檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。 標本的稀釋原則: 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。**計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。 標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。 生物素標記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。 2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。 3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。 5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。 8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。 注: 1. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。 2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。 洗板方法 手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 注意事項 1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。 2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。 5. 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請**乘以稀釋倍數。 6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項: 收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本, 將標本及時分裝后放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。 計算: 以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標, 在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋 倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值 代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋 倍數,即為樣品的實際濃度。 試劑盒性能: 1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。 2.批內與批見應分別小于9%和15% 保存條件及有效期: 1.試劑盒保存:2-8℃。 2.有效期:6個月

雞抗環胍氨酸肽抗體(ACCPA) ELISA 試劑盒

標本的采集及保存 1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 注:標本溶血會影響**檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。 標本的稀釋原則: 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。**計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。 標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。 生物素標記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。 2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。 3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。 5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。 8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。 注: 1. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。 2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。 洗板方法 手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 注意事項 1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。 2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。 5. 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請**乘以稀釋倍數。 6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項: 收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本, 將標本及時分裝后放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。 計算: 以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標, 在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋 倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值 代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋 倍數,即為樣品的實際濃度。 試劑盒性能: 1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。 2.批內與批見應分別小于9%和15% 保存條件及有效期: 1.試劑盒保存:2-8℃。 2.有效期:6個月

雞膀胱腫瘤抗原(BTA) ELISA 試劑盒

標本的采集及保存 1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 注:標本溶血會影響**檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。 標本的稀釋原則: 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。**計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。 標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。 生物素標記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。 2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。 3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。 5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。 8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。 注: 1. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。 2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。 洗板方法 手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 注意事項 1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。 2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。 5. 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請**乘以稀釋倍數。 6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項: 收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本, 將標本及時分裝后放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。 計算: 以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標, 在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋 倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值 代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋 倍數,即為樣品的實際濃度。 試劑盒性能: 1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。 2.批內與批見應分別小于9%和15% 保存條件及有效期: 1.試劑盒保存:2-8℃。 2.有效期:6個月

雞τ-蛋白激酶1(τPK1) ELISA 試劑盒

標本的采集及保存 1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 注:標本溶血會影響**檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。 標本的稀釋原則: 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。**計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。 標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。 生物素標記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。 2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。 3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。 5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。 8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。 注: 1. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。 2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。 洗板方法 手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 注意事項 1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。 2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。 5. 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請**乘以稀釋倍數。 6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項: 收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本, 將標本及時分裝后放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。 計算: 以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標, 在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋 倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值 代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋 倍數,即為樣品的實際濃度。 試劑盒性能: 1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。 2.批內與批見應分別小于9%和15% 保存條件及有效期: 1.試劑盒保存:2-8℃。 2.有效期:6個月

雞NOD樣受體(NLR) ELISA 試劑盒

標本的采集及保存 1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 注:標本溶血會影響**檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。 標本的稀釋原則: 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。**計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。 標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。 生物素標記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。 2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。 3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。 5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。 8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。 注: 1. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。 2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。 洗板方法 手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 注意事項 1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。 2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。 5. 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請**乘以稀釋倍數。 6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項: 收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本, 將標本及時分裝后放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。 計算: 以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標, 在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋 倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值 代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋 倍數,即為樣品的實際濃度。 試劑盒性能: 1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。 2.批內與批見應分別小于9%和15% 保存條件及有效期: 1.試劑盒保存:2-8℃。 2.有效期:6個月

雞雌激素受體α(ERα) ELISA 試劑盒

標本的采集及保存 1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。 注:標本溶血會影響**檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。 標本的稀釋原則: 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。**計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。 標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。 生物素標記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。 操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。 2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。 3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。 5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。 8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。 注: 1. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。 2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。 洗板方法 手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 注意事項 1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。 2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。 5. 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請**乘以稀釋倍數。 6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項: 收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本, 將標本及時分裝后放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。 計算: 以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標, 在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋 倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值 代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋 倍數,即為樣品的實際濃度。 試劑盒性能: 1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。 2.批內與批見應分別小于9%和15% 保存條件及有效期: 1.試劑盒保存:2-8℃。 2.有效期:6個月

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